分子熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
熒光強度跟很多因素有關(guān),如分子結(jié)構(gòu)、存在狀態(tài)、溶液濃度或薄膜厚度、溫度、選擇的激發(fā)波長、測試狹縫寬度等因素。熒光強度在不同儀器上的測量值存在較大差異,不具有可比性,但是其峰位還是較容易確定的,可以用來判斷何種物質(zhì)。進行熒光定量分析,必須固定一些條件。
分子熒光分光光度計的基本結(jié)構(gòu)分以下五種:
1.光源:為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜,且在300nm-400nm范圍內(nèi)強度幾乎相等,故較常用。
2.激發(fā)單色器:置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。
3.發(fā)射單色器:置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4.檢測器:一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉(zhuǎn)為電信號。
5.樣品室:通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。丈量液體時,光源與檢測器成直角安排;丈量固體時,光源與檢測器成銳角安排。